產(chǎn)氣腸桿菌PCR試劑盒屬于腸桿菌科腸桿菌屬，為革蘭氏陰性兼性厭氧桿菌，是一種條件致病菌。當(dāng)宿主機體狀態(tài)改變或細菌進入腸道以外的部位，可引起呼吸道、泌尿生殖道、血液等感染，也是老年人感染或院內(nèi)獲得性肺炎的常見致病菌。產(chǎn)氣腸桿菌可以產(chǎn)生B一內(nèi)酰胺酶，多年來由于抗生素的濫用，該類細菌引起醫(yī)院感染的概率不斷上升，已成為院內(nèi)感染常見的條件致病菌。
產(chǎn)氣腸桿菌PCR試劑盒具有以下優(yōu)點：
1、本發(fā)明采用基因克隆技術(shù)，將產(chǎn)氣腸桿菌Cad基因片段插入到載體pMD18-T中，獲得含有Cad基因片段的重組質(zhì)粒，以此作為標(biāo)準(zhǔn)品。根據(jù)產(chǎn)氣腸桿菌Cad基因片段編碼基因序列設(shè)計并合成一組特異性引物和探針，優(yōu)化PCR反應(yīng)條件，建立以實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)為平臺的檢測方法，并對所建立的方法進行評估。
2、本發(fā)明通過提取產(chǎn)氣腸桿菌的基因組DNA，結(jié)合實時熒光定量PCR檢測技術(shù)，可達到準(zhǔn)確定量待測標(biāo)本中產(chǎn)氣腸桿菌含量的目的，對判斷產(chǎn)氣腸桿菌活性菌的含量以及后續(xù)研究泌尿道感染具有重要意義。
3、本發(fā)明快速、靈敏、特異性好。
產(chǎn)氣腸桿菌PCR試劑盒的檢測流程：
檢測樣品前處理
1、食品樣品的直接檢測：樣品處理參考國標(biāo)GB/T 4789.5-2012進行。以無菌操作取檢樣25g（mL），加入裝有滅菌225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)杯，用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8 000 r/min～10 000 r/min均質(zhì)；或加入裝有225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器連續(xù)均質(zhì)1 min～2 min，液體樣品振蕩混勻即可。于41.5 ℃±１℃，厭氧培養(yǎng)16 h～20 h。
2、疑似菌落檢測：直接用接種環(huán)或者無菌TIP頭挑去肉眼可見的菌團，配成1×、10×兩個梯度稀釋液，分別在PCR管中按照以下步驟擴增。
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